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带你深入了解镍Ni柱的使用与保养

点击次数:554更新时间:2023-03-02
  镍Ni柱是大家在蛋白纯化中,应用较多的一种纯化柱料,属于固定化金属离子亲和色谱中的一种,1975年由Porath等发明,其间不断完善发展至今。
  
  原理:过渡金属通过与电子供体配基上,能与金属离子相互作用的羧基或氨基的电负性元素(O,N),形成较稳定的金属螯合物。
  
  在IMAC中,一个Ni2+有六个配位位点,被含有3,4或5个电子供体基团(配位位点)的螯合物固定在吸附剂上,而剩下未被占据的位点暴露于溶液中,能与组氨酸,半胱氨酸,和色氨酸的侧链或组氨酸标签的蛋白特异性结合。
  
  镍Ni柱的使用与保养
  
  镍Ni柱的洗脱通常采用竞争洗脱,先用低浓度的咪唑将杂蛋白和结合不牢的蛋白洗去,再用合适的浓度将目的蛋白洗脱。洗脱的先后顺序与蛋白的结合能力相关。
  
  1、对于一般的预装柱,上样前,样品需要使用0.22μm/0.45μm滤膜进行过滤或者离心处理,以避免样品中有细胞碎片等固体物质,堵塞柱子。
  
  2、如果细胞裂解后非常粘稠,需考虑是否因为DNA、RNA这类核酸物质过多,需要加入核酸酶去除,以降低样品粘稠度,提高上样速度及洗脱效果。
  
  3、柱子使用过程中,不能超过填料的压力,以免填料被压塌。
  
  4、每次使用后,可使用5-10倍柱体积的纯水或者结合缓冲溶液对柱子进行清洗。(如果出现载量严重下降或者压力增加,需考虑彻底清洗)
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