总结His抗体蛋白纯化的常见问题及解决方法

　　His抗体能够特异性识别His标签，可以用于定性定量检测His融合蛋白的表达、细胞内定位等。为了让大家详细的了解该抗体，下面小编就介绍一下标签抗体进行蛋白纯化常见的问题及解决方法。

　　

　　His抗体蛋白纯化常见问题：

　　

　　一、蛋白不和介质结合

　　

　　可能原因：超声功率不合适（太大，蛋白碳化，太小，蛋白没*释放）

　　

　　解决方法：改变超声功率或者其它方法破碎细胞。

　　

　　样品或缓冲液不合适

　　

　　解决方法：确保缓冲液中螯合剂，还原剂，咪唑浓度不是很高。

　　

　　His标签暴露不*

　　

　　解决方法：在缓冲液中加变性剂（4-8M尿素，4-6M盐酸胍），然后用IMAC介质纯化。

　　

　　His标签丢失

　　

　　解决方法：必要时增加His的个数并确保正确表达，同时降低上样速度，确保足够的孵育时间。

　　

　　二、His抗体蛋白结合在介质上洗脱困难

　　

　　1、可能原因：洗脱条件太温和

　　

　　解决方法：增加洗脱咪唑浓度或降低pH。

　　

　　2、可能原因：蛋白沉积在介质上

　　

　　解决方法：减少上样量，优化层析条件。

　　

　　3、可能原因：非特异性结合

　　

　　解决方法：缓冲液加2%TritonX-100和NaCl。

　　

　　三、洗脱峰杂质多

　　

　　可能原因：非特异性结合，清洗不*，降解等。

　　

　　解决方法：纯化过程加蛋白抑制剂防止降解，上样完后要*清洗，加一定的NaCl和咪唑减少非特异性结合。

　　

　　四、使用几次，介质结合效率降低，柱效降低

　　

　　可能原因：介质上沉积大量杂质等

　　

　　解决方法：*清洗，IDA/IMAC脱镍再生处理。