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胎牛血清的质量标准及预筛选

点击次数:604更新时间:2023-03-13
  虽然我们对胎牛血清的功能清楚,但血清的成分非常复杂,时至今日对其准确的成分、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识。
  
  其次血清都是批量生产,各批量之间差异很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保证每批血清的相似性极为困难,在细胞培养中避免不了要做血清筛选,那如何筛选血清呢?
  
  血清的质量标准:
  
  1、内毒素标准为不高于5EU/ml。
  
  2、总蛋白含量胎牛血清一般范围是30-40mg/ml,数值偏高偏低都会影响实验的正常进行。
  
  3、血红蛋白标准为不高于20mg/dl。
  
  4、pH。国产血清、大多高于7.5,进口胎牛血清,大多低于7.5,根据PH的高低可用来初步鉴别血清的来源。
  
  5、微生物。包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等,大多都能清除。大肠杆菌噬菌体无法过滤,很难彻底清除,但对血清质量影响不大。病原性病毒,在国产血清中几乎90%以上都存在,是影响国产血清质量的重要原因之一。
  
  在实际筛选时,主要从血清外观和实验操作时细胞的生长状态进行。
  
  从外观上:
  
  1、颜色:根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度。胎牛血清或多或少总有点溶血,因为胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂;
  
  2、澄清度:高质量的胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低,表现为稀薄、清淡;
  
  3、血清沉淀:血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生,对血清质量没有影响,沉淀的产生原因跟加工生产方式、是否反复冻融密切相关,在实验操作中可能会对细胞观察产生影响。
  
  从性能上:
  
  1、细胞形态,在进行血清筛选时首先观察细胞的生长形态是否产生明显变化,以及观察贴壁细胞的贴壁情况,细胞在不同血清培养中可能会出现形态上的差异;
  
  2、倍增时间,一般情况下会选择倍增时间短的血清,值得注意的是血清的影响会传至5代,在进行测试时,先培养五代后进行计倍增时间的计算;
  
  3、克隆形成率,测试时一般选50、100、200个细胞进行平板克隆测试,平均5d左右换一次液,两周后染色计数,对比克隆形成情况。
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