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关于亲和层析介质的使用寿命,你了解多少?

点击次数:504更新时间:2023-02-10
  在生物制药领域,层析纯化是关键步骤,亲和层析介质循环使用次数直接影响分离提纯效果。根据不同产品特性和物料性质,介质寿命均不相同。
  
  本文以金属螯合镍亲和介质为例,通过金属螯合亲和介质的原理与使用方式,来检测介质寿命。金属螯合亲和介质捕获蛋白质表面的氨基酸,分离出对金属离子有吸附作用的多肽、蛋白和核苷酸。针对其纯化原理,研究介质寿命验证方法与清洗检测,为研究不同用途的层析介质寿命提供思路与数据支持。
  
  介质寿命验证是药品研发,尤其是生物制品的重点关注内容。企业在做介质寿命验证时,建议采用等比例缩小纯化规模,确定每步纯化所用介质的使用次数,确保亲和层析介质寿命在使用期限内使用,介质符合生产需求,防止交叉污染,保障产品的质量合格。
  
  亲和层析介质在每次使用时,未被洗脱和流穿的物质或杂质会吸附在填料上,需要采用特定的清洗和再生程序对层析介质进行清洗、再生、保存,以恢复介质开始的状态。长期使用的介质,会逐渐失去效力,如清洗后污染物残留量、介质使用参数变化、产品重要指标(纯度)和收率均不在控制范围之内,则说明介质的寿命已到期。
  
  亲和层析是一种吸附层析,抗原(或抗体)和相应的抗体(或抗原)发生特异性结合,而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原(或抗体)固相化后,就可以使存在液相中的相应抗体(或抗原)选择性地结合在固相载体上,借以与液相中的其他蛋白质分开,达到分离提纯的目的。
  
  与产品实际生产的SOP作对比,如不在SOP控制范围内,则说明介质应该更换了,只有对亲和层析介质进行及时更换,才能确保生物制品质量。
  
  本次研究结果显示,TOC检测值范围在22.700~262.000ppb之间,RSD为77.027%;pH检测值范围在5.400~6.900之间,RSD为7.103%;内毒素检测值范围在0.600~1.100EU/mL之间,RSD为9.443%;蛋白未检出,电导均<0.25μs/cm;TOC洗脱峰图波动明显,pH洗脱峰图稍有波动,但都电导洗脱峰图相对平稳。
  
  结果表明,虽然TOC和pH峰图存在一定波动,但其检测值均处于正常标准范围内,另外内毒素作为辅助参考指标,zui高值达到1.100EU/mL,已超出标准范围,但检测难免存在误差,经计算内毒素平均值仅为0.967EU/mL,符合标准范围。
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