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flag抗体A01868如何进行鉴定,有哪些方法

点击次数:452发布时间:2021-11-22
  flag抗体A01868是一段亲水性八氨基酸短肽,其分子质量约为1.0KDa。抗体可以通过基因重组技术添加到蛋白质的N端或C端,由于flag抗体的尺寸小,亲水性强,不会对蛋白表达、蛋白水解成熟、抗原性等造成影响。
  
  flag抗体A01868的鉴定:
  
  由蛋白浓度的测定公式求得蛋白浓度:A280nm×1.45-A260nm×0.74=蛋白浓度(mg/mL);单抗纯化后,根据纯化前后体积,推算出腹水中蛋白含量。
  
  单抗相对亲和力测定:
  
  以合成的包被原400ng/孔包被酶标板,按行分别加入按一定浓度倍比稀释的纯化单抗,37℃温育30min,洗涤;加入酶标二抗,37℃温育30min,洗涤;加底物显色20min,加终止液终止反应,双波长扫描测定吸光值。
  
  以单抗浓度为横坐标,以所对应的OD值为纵坐标作图,根据反应曲线分析单克隆抗体的相对亲和力。
  
  以抗体浓度的对数值为横坐标,以所对应的OD值为纵坐标作图,得一曲线,取曲线上OD值的50%所对应的横坐标为该抗体的稀释度,算出该抗体总的稀释度后,计算亲和常数。亲和常数计算公式:亲和常数K=160000(抗体分子量)/抗体稀释度×抗体浓度(mg/ml)
  
  flag抗体A01868能够特异性的与标签蛋白上的flag标签结合,能够用于标签蛋白的纯化、定性定量检测蛋白表达水平、细胞内定位等实验。
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