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简单聊聊镍Ni柱L00666的原理及其使用

点击次数:28发布时间:2021-10-25
  镍Ni柱L00666是将Ni NTA金属螯合层析介质装填于层析柱中的即用型亲和层析柱,省去了自行装填层析柱的麻烦和柱效不高的风险,介质和层析柱的结合使层析变得高效简单。
  
  金属离子Ni2+预先螯合在以NTA为配基的琼脂糖凝胶上,具有吸附容量大、选择性好、易于再生、成本低等优点,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质及多肽的分离纯化,尤其是组氨酸标记蛋白质的高效纯化。
  
  镍Ni柱的原理是过渡金属通过与电子供体配基上,能与金属离子相互作用的羧基或氨基的电负性元素(O,N),形成较稳定的金属螯合物。在IMAC中,一个Ni2+有六个配位位点,被含有3、4或5个电子供体基团(配位位点)的螯合物固定在吸附剂上,而剩下未被占据的位点暴露于溶液中,能与组氨酸,半胱氨酸,和色氨酸的侧链或组氨酸标签的蛋白特异性结合。
  
  镍Ni柱L00666的使用:
  
  镍Ni柱的洗脱通常采用竞争洗脱,先用低浓度的咪唑将杂蛋白和结合不牢的蛋白洗去,再用合适的浓度将目的蛋白洗脱。洗脱的先后顺序与蛋白的结合能力相关。
  
  另外,在镍Ni柱的使用中,应当避免缓冲液中存在还原剂和螯合剂,以免Ni2+被还原而脱落。如果柱料使用太久积累了很多杂蛋白,可用EDTA将Ni2+螯合下来,再用NaOH清洗柱料后,重新螯合Ni离子,即可完成再生。镍Ni柱L00666不用时,应保存在20%乙醇中防止长菌。
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