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新手必看:如何自己手动填装镍Ni柱

点击次数:98发布时间:2022-02-21
  镍Ni柱具有很高的稳定性和兼容性,兼容还原性试剂、变性剂、洗涤剂、以及其它添加物。适用于纯化可溶性蛋白和包涵体蛋白。为了让大家更多的了解Ni柱,这里给大家简单介绍一下如何根据实际需求自己填装Ni层析柱。
  
  操作方法:
  
  1、轻轻将镍Ni柱悬浮在水中,沉降后沉积物体积要达到35ml。自然沉降,不要用磁力搅拌器以免打碎微球。
  
  2、将Ni树脂转移到砂芯漏斗中,用50ml纯水洗涤四次,除去储存液中的乙醇等物质,以纯水保存至50ml总体积。
  
  3、用纯水清洗空色谱柱,然后关闭出口阀门,保留1cm高的液面。
  
  4、通过玻璃三角漏斗将步骤2的树脂泥浆倒入色谱柱中,用纯水将柱子填满。
  
  5、在柱子顶端安上接头并将之与泵连接,以一定的流速13ml/min(或400cm/h)。不要超过规定的树脂或柱子的使用压力。
  
  6、保持流速,体积稳定后再流3倍柱体积。标记柱床高度。
  
  7、关闭流速,关掉镍Ni柱的出口。断开顶端接头与泵,将顶端接头移至标记处,固定接头。
  
  8、用1倍柱体积的0.1M硫酸镍以5ml/min流经柱子。
  
  9、用10倍柱体积的水以10ml/min洗掉未结合的Ni离子。
  
  10、如果柱子不马上使用,用20%乙醇以10ml/min的流速洗涤四倍柱体积后保存。
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